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ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

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，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：

稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；

稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；

稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；

每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。

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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。

当然是假的，参茸保胎丸是纯中药制成，其药方安全性非常的高，并不会对胎儿造成任何的不良婴儿。而那些说自己吃参茸保胎丸导致胎儿畸形的孕妇，多是自身原因或者染色体异常导致胎儿发育畸形，刚好这之前吃过该药保胎，所以将其过错归结于参茸保胎丸上。参茸保胎丸是产科临床上常用的药物，其本身是用于保胎的，但服药过程中也需要在医生指导才行，以免适得其反。

参茸保胎丸是由党参、香附、艾叶、熟地黄、甘草、川芎、鹿茸、砂仁、龙眼肉、茯苓、白术、白芍、当归、羌活、杜仲、化橘红、菟丝子、山药、黄芩、阿胶、桑寄生、续断、川贝母等药材制成，其主要功能是滋养肝肾，补血安胎。

参茸保胎丸，顾名思义，是用来保胎治疗的，其中含有很多名贵的保胎药材，具有保胎的作用。其实该药不少孕妇都有使用过，我们看看大家都是怎么评价该药物的。

孕早期流血多，因为怕用西药对宝宝影响大，专门去了中医院让给开的参茸保胎丸，吃了3天血就少很多了。但我胚胎本身就有问题，后面还是没保住。

网友喝麻咯

我一胎的时候就用的这药，宝宝现在出生一点事没有，我看哪些出事的都是自己私下用药的孕妇，这里还是奉劝大家，保胎还是请专业人士指导吧，咱们不是医生，到时候出事还只能自己担着。

网友波波利

网上确实有很多人在传吃参茸保胎丸有副作用，我也不知道哪来的这种消息，如果真的会导致胎儿畸形，人医院用它干嘛？

网友爱丽丝

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